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Cyclosporin A

发布时间:2019-09-11 来源:原创/投稿/转载 作者:admin 人气:

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  Cyclosporin A是一种免疫抑制剂,与亲环素结合,随后抑制calcineurin,无细胞试验中IC50为7 nM,广泛用于预防反应中的排斥反应。

  Cyclosporin A是一种免疫抑制剂,小鼠,大鼠,和荷兰猪经非肠道给药或者口服给药都有效,临床上用于中预防免疫排斥。

  纯化的牛脑钙调磷酸酶和钙调蛋白是购买的。含纯化酶的反应混合物包含100 nM 钙调磷酸酶,100 nM 钙调蛋白,以及5 M 32P-标记磷酸化多肽,60 l (总体积) 试验缓冲液包含20 mM Tris (pH 8),100 mM NaCI,6 mM MgCl2,0.5 mM 二硫苏糖醇, 每毫升0.1毫克牛血清白蛋白,以及0.1 mM CaCl2或5 mM EGTA。含细胞裂解物的反应混合物包含20 l of未稀释裂解物, 5 M 32P-标记的磷酸肽,和40 l 试验缓冲液。反应混合物包含50 M 多肽412或413和/或 500 nM冈田酸,一种磷酸酶1和2A的特异性抑制剂; 500 nM 冈田酸足以抑制Ca2+-不依赖性磷酸酶,而更高浓度时也会部分抑制Ca2+-依赖性的活性。30C下培育15分钟,加入0.5 ml包含5% 三氯乙酸的100 mM 磷酸钾缓冲液(pH 7.0)终止反应。Dowex阳离子交换色谱分离无机磷酸盐,用闪烁计数测定数量。

  免疫抑制剂以细胞治疗浓度的1000倍溶于乙醇。细胞(106)悬浮于微量离心管1ml完全培养基中;1 l乙醇或者Cyclosporin A乙醇溶液加入反应液中,细胞在37C下培育1小时。细胞在冰浴下用1ml PBS洗两次,在50l低渗缓冲液中裂解,缓冲液每毫升包含50 mM Tris (pH 7.5); 0.1 mM EGTA; 1 mM EDTA; 0.5 mM二硫苏糖醇; 以及50 微克苯甲基磺酰氯,50 微克胰蛋白酶抑制剂,5微克亮抑酶肽,和5 微克抑肽酶。裂解液用液氮冷冻,再在30C下融化,循环3次,随后在 4C下以12,000×g离心10分钟。

  用途及描述:科研试剂,广泛应用于分子生物学,药理学等科研方面。严禁用于人体

  ●我司产品为非无菌包装,若用于细胞培养,请提前做预处理,除去热原细菌,否则会导致染菌。

  ●部分产品我司仅能提供部分信息,我司不保证所提供信息的权威性,以上数据仅供参考交流研究之用。

  我司所售出产品仅供于科研研究用途,每次销售产品行为都适用于我司网上所列明的通用销售条款。

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